Xist基因调控及对牛SCNT早期胚胎发育的影响

【摘要】Xist是产生一个非编码RNA的与X染色体相关的基因,它是在合子期基因组开始激活,并且是胚胎早期发育表达的第一个印记基因。尽管Xist是在雌性动物中参与X染色体失活,但XistRNA的功能尚未被完全认知。在动物克隆胚胎发育中许多基因表达异常,Xist也是这些异常表达基因之一。前期研究表明,利用Xist基因缺陷型供体细胞用于克隆实验,可成功将小鼠克隆效率提高8-9倍。本实验探讨了TAALE载体转染到胎牛成纤维细胞调控Xist基因表达的可行性,并且以抑制Xist基因表达的细胞作为供体制作克隆胚胎,研究Xist基因调控对牛克隆胚早期发育影响。实验结果显示,本实验设计特异性抑制Xist表达载体TALER转染雌性胎牛成纤维细胞,并用mCherry作为载体转染效率检测的报告基因。通过流式细胞仪进行分选获得阳性细胞后直接提取R.NA,反转录扩增cDNA,与同一来源细胞系进行RealtimeRT-PCR对Xist表达水平检测,结果发现实验组细胞Xist旧对表达量下调93.85%,说明本实验设计的载体转染系统能够有效限制Xist基因的表达。选取Xist基因抑制表达阳性的转染细胞用于体细胞核移植实验,同时用未经处理的细胞作为对照,实验组和对照组的卵裂率、8细胞发育率、桑葚胚发育率和囊胚发育率分别为78.8%vs75.1%(P>0.05,无显著差异)、54.4%vs50.6%(P>0.05,无显著差异)、12.3%vs27.8%(P<0.01,差异极显著)、0vs26.6%(P<0.01,差异极显著)。上述实验结果表明,本实验设计的特异性抑制Xist表达载体TALER可有效地抑制雌性胎牛成纤维细胞Xist基因表达,但这种基因下调细胞用于克隆实验时发现与对照组相比2-8细胞克隆胚胎发育略有提升,但囊胚期和桑葚胚期的克隆胚胎发育率明显降低,其机制有待于进一步探讨。
【作者】刘黎明；
【导师】李喜和；
【作者基本信息】内蒙古大学，动物学，2014，硕士
【关键词】Xist基因；TALER载体；胎牛成纤维细胞；克隆胚胎早期发育；

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